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Cytoskeleton，Inc。很高兴为药物筛选，信号转导和细胞骨架研究提供广泛的试剂盒和产品。我们专注于生产纯化蛋白质和易于使用的试剂盒，以研究生物化学和细胞过程。我们的试剂盒可用于少量样品，用于基础研究或小屏幕（Biochem Kits™），也可用于大屏幕的高通量样品（CytoDYNAMIX Screens™）。
除了我们现有的产品，我们还在产品线中为微管，微管蛋白，运动蛋白，小G蛋白效应物，GAP，GEF和其他几种蛋白提供药物筛选服务。
· 概述
· 关于
· CITATIONS
· 常见问题解答
测定所有肌动蛋白结合蛋白（ABP）以确保其活性与公布的值相当。测定因产品而异，包括F-肌动蛋白切断测定，F-肌动蛋白激活的ATP水解和肌动蛋白聚合测定。显示了测量WASP VCA结构域蛋白在肌动蛋白聚合中的作用（右）。
Cytoskeleton，Inc。销售一系列纯化的肌动蛋白结合蛋白。所有Cytoskeleton的肌动蛋白结合蛋白都具有高纯度，并经过严格的生物活性测试。细胞骨架还为肌动蛋白结合蛋白研究提供肌动蛋白，抗体和试剂盒。 |
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由Arp2 / 3和WASP VCA结构域刺激的肌动蛋白聚合。试剂盒BK003用于研究Arp2 / 3（Cat。＃RP01）和WASP VCA（Cat。＃VCG03）结构域对肌动蛋白聚合的影响。 |
问题1：哪种肌动蛋白结合蛋白（ABP）可用作F-肌动蛋白结合对照？
答案1：肌动蛋白结合蛋白α-辅肌动蛋白（Cat。＃AT01）是一种F-肌动蛋白结合和交联蛋白，使其可用作F-肌动蛋白结合研究的对照。它的Kd是1μM，这意味着在该浓度下发生50％结合。因此，我们的目标是使用 2μM的α-肌动蛋白作为结合测定中的阳性对照。在结合反应中，2μM浓度的α-辅肌动蛋白相当于0.23μg/μl。此外，α-辅肌动蛋白对pH敏感，其高亲和力发生在pH 7.0。
问题2：Cytoskeleton的肌球蛋白或重的meromyosin是否具有F-肌动蛋白活力？
答案2：遗憾的是，我们不会出售运动级肌球蛋白或重肌红蛋白用于肌动蛋白运动试验。我们发现质量控制测试非常难以复制，因此我们无法充分确保试剂的质量。因此，肌球蛋白（Cat。＃MY02和MY03）和重型meromyosin蛋白（Cat。＃MH01）不推荐用于F-肌动蛋白运动测定。已经测试过这些试剂的客户在运动方面没有取得很好的成功，因此我们不建议购买样品进行测试。如果需要运动级肌动蛋白或重型meromyosin，我们建议遵循原始方案（Kron和Spudich，1985）并在液氮中冷冻100μl等分试样以确保稳定性。
参考文献： SJ Kron和JA Spudich，1985年。荧光肌动蛋白丝在固定在玻璃表面的肌球蛋白上移动。PNAS，83,6272-6276。
窗体顶端
2x50 ug (Cat. # RP01P-A)
6x50 ug (Cat. # RP01P-B
窗体底端
产品用途包括
· 体外肌动蛋白聚合刺激化合物的阳性对照
· 发现Arp2 / 3激活或抑制化合物
· Arp2 / 3相互作用蛋白的表征和发现
材料
Arp2 / 3蛋白质复合物由7个蛋白质亚基组成，均以大致相等的化学计量比存在（见图1）。Arp2 / 3复合物是肌动蛋白丝成核的关键调节因子，蛋白质亚基在进化上是高度保守的。蛋白质复合物已从猪脑中纯化，并以冻干粉末形式提供。当用蒸馏水重构，所述复合物是在以下缓冲液为：20mM Tris pH值7.5，25mM的氯hua钾，1毫摩尔MgCl 2，0.5mM的EDTA，0.1mM的ATP，1％葡聚糖和5％的蔗糖。Arp2 / 3复合物的分子量为224kDa。
注意： 来自procine大脑的RP01P取代牛脑中的RP01。我们比较了两种来源的Arp2 / 3复合物的活性，并发现它们在肌动蛋白聚合试验中表现相同（见图2）
纯度
通过在4-20％聚丙烯酰胺凝胶上扫描考马斯蓝染色蛋白的光密度测定法测定纯度。确定Arp2 / 3蛋白质复合物纯度为90％（参见图1）。
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| 图1.Arp2 / 3蛋白纯度测定： 在4-20％SDS-PAGE系统中通过电泳分离10μg的Arp2 / 3复合物样品，并用考马斯蓝染色。用Precision RedTM Protein Assay Reagent（Cat。＃ADV02）测定蛋白质定量。Mark12分子量标记来自Life Technologies。 |
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在肌动蛋白聚合测定（Cat。＃BK003）中测试生物活性 RP01P 。结合WASP（Cat。＃VCG03）的VCA结构域，一种Arp2 / 3激活剂，与没有RP01的对照相比，它显示刺激肌动蛋白聚合20倍。这表明对肌动蛋白聚合诱导的Arp 2/3特异性（图2）。
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| 图2.使用Arp2 / 3和VCA结构域蛋白的 肌动蛋白聚合测定：如该方法中所述进行肌动蛋白聚合; 所有反应均含有0.8μM肌动蛋白。含有Arp2 / 3或VCA的反应（数据未显示）显示肌动蛋白成核很少或没有增强。单独的肌动蛋白在这些条件下（单独的肌动蛋白反应）也显示出低聚合能力。然而，在存在VCA结构域的情况下，Arp2 / 3导致肌动蛋白成核的增强（注意聚合的陡峭成核阶段）。随时间以任意荧光单位测量肌动蛋白聚合。在我们的测试中，猪衍生的Arp2 / 3（孔E＆F）表现出与源自牛源（孔G＆H）的Arp2 / 3相同的表现。 |
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问题1：存储Arp2 / 3（Cat。＃RP01P）的*方法是什么？
答案1： 将干燥的冻干的Arp2 / 3蛋白质（<10％湿度）保存在4°C，稳定6个月。冻干蛋白也可以在-70°C下干燥储存，在那里它可以稳定6个月。但是，在-70°C时，管盖上的橡胶密封可能会破裂并产生水分。因此，我们建议在4°C下储存。如果储存在-70°C，如果使用这种储存条件，则必须在干燥剂中加入冻干蛋白。用10μl冷的Milli-Q水将蛋白质复合物重悬至5mg / ml。重悬后，复合物在以下缓冲液中：20 mM Tris pH 7.5,25 mM KCl，1 mM MgCl 2，0.5mM EDTA，0.1mM ATP，1.0％（v / v）葡聚糖和5％（v / v）蔗糖。然后将蛋白质等分成实验大小的量，在液氮中快速冷冻并在-70℃下储存，在此稳定6个月。Arp2 / 3的进一步稀释应在以下缓冲液中进行：20mM Tris pH 7.5,25mM KCl，1mM MgCl 2和1mM DTT（注意：在使用前立即将DTT加入缓冲液中）。注意：将液体氮中的Arp2 / 3蛋白快速冷冻非常重要，因为其他冷冻方法会导致活性显着降低。通过置于室温水浴中1分钟快速除霜。避免反复冻/融循环。
问题2：Arp2 / 3（Cat。＃RP01P）是否与肌动蛋白聚合试剂盒（Cat。＃BK003）兼容？
答案2： 是的，Arp2 / 3与肌动蛋白聚合试剂盒（Cat。＃BK003）配合使用可以很好地研究肌动蛋白结合蛋白对肌动蛋白聚合的影响。有关其他信息，请参阅Arp2 / 3数据表（Cat。＃RP01P）。Arp2 / 3复合物能够在体外以1：200的摩尔比（Arp2 / 3：肌动蛋白）诱导肌动蛋白丝的支化聚合。这种刺激在体外可观察到聚合试验; 然而，在典型的聚合条件下，单独的Arp2 / 3的刺激非常低。在存在N-WASP蛋白（或N-WASP的VCA结构域，Cat。＃VCG03）的情况下，Arp2 / 3的成核活性大大增强。在Arp2 / 3数据表中描述的聚合测定中，芘肌动蛋白（Cat。＃AP05或BK003）的终浓度为0.8μM，Arp2 / 3复合物为10 nM，VCA结构域（Cat。＃VCG03） ）是400 nM。
注意： 来自procine大脑的RP01P取代牛脑中的RP01。我们比较了两种来源的Arp2 / 3复合物的活性，并发现它们在肌动蛋白聚合试验中表现相同。以下测定参考Arp2 / 3蛋白复合物：牛脑（Cat.RP01）。
Leng，Y.，Zhang，J.，Badour，K.，Arpaia，E.，Freeman，S.，Cheung，P.，Siu，M。和Siminovitch，K。（2005）。Abelson-interactctor-1促进WAVE2活化所需的WAVE2膜易位和Abelson介导的酪氨酸磷酸化。PROC。国家科。科学院。科学。美国102,1098-1103。
van der Gucht，J.，Paluch，E.，Plastino，J。和Sykes，C。（2005）。应力释放驱动基于肌动蛋白的运动的对称性破坏。PROC。国家科。科学院。科学。美国102,7847-7852。
货号 | 品名 | 规格 | 品牌 |
BK165-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK165 | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK163-S | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK163 | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK160-S | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK160 | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK162-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK162 | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK161-S | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK161 | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
AAC04-Beads | Acetyl-Lysine Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
APY03-Beads | Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
ASM11-Beads | SUMOylation 1 Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
ASM24-Beads | SUMOylation 2/3 Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
UBA01-Beads | Ubiquitination Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
CIG02-Beads | Acetyl-Lysine Control Beads | ea | cytoskeleton |
CIG03-Beads | SUMO1 IP Control Beads | ea | cytoskeleton |
CIG01-Beads | IgG Control Beads | ea | cytoskeleton |
CUB02-Beads | Ubiquitination Control Beads | ea | cytoskeleton |
BLR01 | BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit | ea | cytoskeleton |
BLR02 | BlastR™ Rapid Filtration Kit | ea | cytoskeleton |
AAC02 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1) | ea | cytoskeleton |
AAC03 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton |
AAC03-HRP | Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton |
AAC01 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20) | ea | cytoskeleton |
APY03 | Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton |
APY03-HRP | Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton |
ASM01 | SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16) | ea | cytoskeleton |
ASM24 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2) | ea | cytoskeleton |
ASM23 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton |
ASM23-HRP | SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton |
AUB01 | Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton |
AUB01-HRP | Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton |
PHDG1 | Acti-stain 488 phalloidin | ea | cytoskeleton |
PHDH1 | Acti-stain 555 phalloidin | ea | cytoskeleton |
PHDN1 | Acti-stain 670 phalloidin | ea | cytoskeleton |
BK001 | Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton |
BK003 | Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton |
AKL95 | Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AD99 | Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton |
AS99 | Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle | ea | cytoskeleton |
AKL99 | Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AKF99 | Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AP05 | Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
APHR | Actin protein (rhodamine): human platelet | ea | cytoskeleton |
AR05 | Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AT01 | Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
RP01P | Arp2/3 protein complex: porcine brain | ea | cytoskeleton |
CS-TFC01 | Cardiac Thin Filament Complex (CTFC) | ea | cytoskeleton |
CF01 | Cofilin 1 protein: human recombinant | ea | cytoskeleton |
HPG6 | Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant | ea | cytoskeleton |
MH01 | Heavy meromyosin protein | ea | cytoskeleton |
CS-MH03 | Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment) | ea | cytoskeleton |
CS-MYS03 | Myosin - cardiac S1 fragment | ea | cytoskeleton |
CS-MYS04 | Myosin - skeletal muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton |
CS-MYS05 | Myosin - smooth muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton |
MY02 | Myosin II protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
MY03 | Myosin protein: bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton |
PR02 | Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant | ea | cytoskeleton |
PHDR1 | Rhodamine Phalloidin | ea | cytoskeleton |
CY-SC001 | SiR-Actin Kit | ea | cytoskeleton |
CY-SC013 | SiR700-Actin Kit | ea | cytoskeleton |
VCG03 | WASP protein VCA domain: GST tagged: human | ea | cytoskeleton |
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