牛胰腺脱氧核糖核酸酶是一种内切核酸酶,可分裂磷酸二酯键,优先与嘧啶核苷酸相邻,产生在3'位具有游离羟基,在5'位具有磷酸基的多核苷酸。极限消化的平均链长是四核苷酸。
用途:沃辛顿(Worthington)为不同应用提供不同纯度的DNase。产品代码:DPRF和DPRFS都是专门为分子生物学应用设计的,并且含有低水平的RNase和蛋白酶活性。它们都适合用于在完整的RNA回收中需要DNA消化的技术中,或必须保持结构蛋白或酶的完整性的技术中。应用包括缺口翻译,DNA定位,核RNA和蛋白质的分离,质粒构建以及RNA探针和RT-PCR的RNA聚合酶合成。DNase还用于组织培养工作,以从受损细胞中消化DNA,从而降低粘度并去除膜结合的DNA片段。沃辛顿代码:DP和DCLS适用于这些应用。
稳定性/储存性:正确存放后,所有等级的沃辛顿脱氧核糖核酸酶都可以稳定2-3年。所有等级的沃辛顿DNA酶的建议存储温度为2-8°C。产品代码DPRFS可以存储在-20°C下。为了长期保存在溶液中,可以将产品代码D和DPFF溶于5mM乙酸盐,1mM钙,pH 4.5中,并以单次使用的等分试样在-20°C或-70°C下保存长达一年。仅冻结并融化一次;解冻后的等分试样至少要稳定冷冻几周。添加50%的甘油将在-20°C保持液态,而不会影响稳定性,并且可以去除50%甘油中的物质,并反复回到-20°C。由于缺乏蛋白酶,DPRF非常稳定。要在重构后长期保存DPRF,请使用水或pH 4.0至9.0以外的任何缓冲液(磷酸盐除外);避免钙螯合剂;加入50%甘油,在-20°C下以液体形式存储;分装在一次性容器中;只冻结和融化一次;解冻后的等分试样至少要稳定冷冻几周。
单位定义:1当作用于pH 5.0的高度聚合的DNA时,在260 nm处的吸光度每分钟每毫升0.001导致增加0.001每分钟。 注意:其他供应商报告的Kunitz单位可能比在Worthington测量的Kunitz单位高2到4倍。如在沃辛顿(Worthington)测得的,一个Kunitz单元在50µl反应中于37°C在50mM Tris,1mM Mg 2 +,1mM Ca 2 +,pH 7.8中于10分钟内消化1µgλDNA 。对于其他DNA和缓冲液系统,消化单位与Kunitz单位的相关性是不同的。
技术说明:产品代码DPRF:每10,000单位DNase I,每个样品瓶包含约2mg甘氨酸和2µmoles钙。将整个样品瓶溶于5ml可提供相当于1 mg / ml的溶液。
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