IUB：3.4.24.3

胶原酶原料认证 

粗胶原酶制剂含有两种不同胶原酶的几种同工型，一种巯基蛋白酶、梭菌蛋白酶、一种胰蛋白酶样酶和一种氨肽酶。这种胶原蛋白水解和蛋白水解活性的组合可有效分解细胞间基质，这是组织解离的重要部分。该复合物的一个成分是水解酶，它优先在序列 Pro-Y-Gly-Pro 中的 Y-Gly 键处降解天然胶原蛋白中的螺旋区域，其中 Y 最常见的是中性氨基酸。这种切割产生对进一步肽酶消化敏感的产物。粗胶原酶被半胱氨酸、EDTA 或邻菲咯啉等金属螯合剂抑制，但 DFP 不抑制。它也被一种大的血浆糖蛋白α2-巨球蛋白抑制。钙2+是酶活性所必需的。每种胶原酶的特定酶谱已与从中获得研究细胞的组织（或与放置细胞的用途）相关，并且作为相关性的结果，Worthington 已经建立了几种类型的粗胶原酶：类型 1、2、3 和 4。

• 1 型粗胶原酶具有胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
• 2 型含有较高相对水平的蛋白酶活性，尤其是梭菌蛋白酶。
• 3 型含有低水平的二级蛋白酶。
• 4 型被设计成胰蛋白酶活性特别低，以限制对膜蛋白和受体的损害。
• 5 型 含有较高的胶原酶和酪蛋白酶值。
• 6 型 含有高胶原酶活性，酪蛋白酶与胶原酶的比例约为 2:1。设计为相对于 I 型 ( col  G)富含 II 型 ( col  H) 胶原酶。
• 7 型胶原酶和酪蛋白酶的活性比 1 型和 2 型胶原酶高四倍。

 •纯化的胶原酶，代码：CLSPA，含有最少的二次蛋白水解活性和高胶原酶活性。

Worthington 还提供预包装形式的每种类型的 0.22µm 过滤制剂，用于直接重组和用于细胞分离和培养程序。酶类型和不同组织的有效性之间的相关性很好，部分原因是使用的可变参数。然而，大多数研究人员认为粗胶原酶批次的组织分型是一项有价值的服务。Worthington 胶原酶和污染物检测的详细说明可在Worthington 酶手册中找到。此外，组织特异性参考和详细的分离条件可以在Worthington 组织分离指南中找到。

胶原酶测定是Mandl的改进，其中将胶原酶与天然胶原一起温育5小时，并使用Moore and Stein, JBC, 176 , 367, (1948)比色茚三酮法测定胶原分解的程度。释放的氨基酸以每毫克胶原酶微摩尔亮氨酸表示。

用途：粗胶原酶广泛用于酶促原代细胞分离和组织解离程序。大多数研究人员要么使用粗制胶原酶制剂，例如 1、2、3 和 4 型，要么使用色谱纯化的胶原酶（代码：CLSPA）；后者通常与二级酶如弹性蛋白酶、透明质酸酶等结合。为了获得最佳结果，必须针对要解离的组织调整蛋白水解活性的精确混合。不同组织的类型和有效性之间的相关性很好，并且可能部分取决于使用参数和目标以及批次间的差异。如需更多信息，请参阅胶原酶取样程序信息。Worthington 还出版了组织分离指南它提供了有关用于这些应用的酶的更多信息以及多种细胞和组织类型的具体参考。

单位定义：一个单位在 37°C、pH 7.5 下 5 小时内从胶原蛋白中释放 1 微摩尔 L-亮氨酸当量

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