重组猪源RNase抑制剂说明书
上海起发生物科技有限公司(Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.)属于B体育备用网址 (2009年成立)旗下的子公司,成立的初衷是建立上海起发生物自有品牌,打造优质的生物试剂民族自有品牌。降低成本的同时,把好生物产业链中的国产生物试剂品质关。未来让每一个和我们一样拥有民族情怀的企业,共同创世界优秀的中国生物制造企业,圆梦中国。
产品详情
货号 | 规格 | 价格 |
78BAB10003-100uL | 100uL(4KU) | ¥200.00 |
78BAB10003-1ml | 1ml (40KU) | ¥1600.00 |
78BAB10003-50ml | 50ml (2MU) | ¥50000.00 |
产品描述
本产品是以大肠杆菌中进行表达,并通过亲和层析纯化的重组猪源RNase抑制剂,该蛋白特征与猪肝和人胎盘来源此类酶相似,可替代天然提取 RNase Inhibitor的应用。本产品与RNase A形成1: 1复合体,抑制RNase活性。该反应是可逆的,通过尿素及巯基类试剂能够解离复合体,使RNase复性而抑制剂不可逆失活。本产品与其它竞争性抑制剂(核酸类,无机磷酸类)不同,可以很容易地通过苯酚处理将其从反应体系中除去,但不能抑制逆转录酶的RNase H的活性。使用时可直接加入含有RNA的反应液中用于cDNA第一链合成、体外转录和体外翻译等实验。
产品特点
· cDNA合成
· 体外转录
· 体外翻译
· 1-Step RT-qPCR
产品组分
缓冲液成分:20 mM HEPES-KOH(pH 7.6),50mM KCl,8mM DTT,50% (v/v) glycerol。
使用方法
使用方法
温馨提示:需要用无RNA酶的PCR管中配制RNA/引物预混液
1 cDNA合成
(1)在无RNA酶的PCR管中配制RNA/引物预混液
组分 | 反应体积(10ul) |
Oligo(dT)20 (或Random primer) (或基因特异引物) | 25pmoles (25pmoles) (5pmoles) |
10mM dNTPs | 2µL |
模板RNA | 2pg-5µg |
DNase/Rnase Free Water | 10ul |
(2)65℃加热5min,立即置于冰上
组分 | 反应体积(10ul) |
RNA引物预混液 | 10ul |
5x RT Buffer | 4µL |
BIOHUB Reverse Transcritase | 1ul |
RNase inhibitor(40U/µL) | 1ul |
100mM DTT | 2ul |
DNase/Rnase Free Water | 补足20ul |
(3)轻轻混匀,按如下反应条件设置
逆转录反应条件 | ||
1 | 42℃ | 20-60min |
2 | 99℃ | 5min |
备注:逆转录温度可在42-60℃之间调整,反应时间建议在20-60min内调整
(4)得到的cDNA溶液可以直接用于第二链cDNA合成及后续PCR反应。
优化参考方法
优化参数 | 参考范围 |
逆转录 | 50-60℃ 5-15min |
预变性温度时间 | 95-98℃ 10sec-5min |
变性温度 | 95-98℃ 3sec-10sec |
延伸/退火温度 | 60-65℃ 5sec-30sec |
注意事项
1. 本产品在PH7〜8时表现最佳抑制RNase活性。
2. 本产品发挥活性作用至少添加1 mM的DTT。
3. 本产品不抑制RNase H活性及逆转录酶活性。
运输及保存方法
-20℃可保存12个月。
电话
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