在生物医药领域中,基因治疗被誉为下一代的医疗革命。作为基因治疗的关键一环,载体病毒的制备和优化是决定基因治疗成功与否的关键步骤之一。其中,慢病毒因其能够稳定持久地感染分裂和非分裂细胞,被广泛用于基因治疗研究中。然而,慢病毒的纯化却是一个充满挑战的技术难题。
目前,慢病毒的纯化主要采用超速离心沉淀和离子交换层析的方法。然而,这些方法存在一些问题。例如,超速离心需要高转速设备,不适于放大生产;而离子交换方法则需要高盐洗脱,对慢病毒活性损伤较大,收率较低。
慢病毒结构复杂,对低pH,高盐,温度和剪切力非常敏感,现有的纯化方法还存在着得率低、成本高、操作繁琐等问题。Astrea Bioseparations推出了新型纳米纤维(AstreAdept™)基质LV纯化填料LentiHERO,大大提高了感染性LV得率、速度和载量,其可放大到生产规模。
AstreAdept®新一代纳米纤维色谱技术:
AstreAdept™是一种新型纳米纤维材料,不同于传统凝胶介质,它能通过快速的对流模式迅速捕获大量的目的蛋白,使得工艺运行流速不再受限于凝胶孔径大小。AstreAdept™平均流道直径860nm,具有优异的靶标流动特性。
LV 常规纯化工艺搭配新颖的 AstreAdept®
LentiHERO®基于AstreAdept® 纳米纤维技术帮助开发建立高效纯化平台
新型LV 纯化工艺——LentiHERO® Adsorbents
澄清条件 1: 超滤换液体积优化
比较1-3倍换液体积对感染滴度(TU),宿主蛋白(HCP)和双链DNA(dsDNA)浓度的影响
Nereus LentiHERO® 纯化分析
澄清条件 2 :离心和超滤(MWCO)
Nereus LentiHERO® 6种澄清条件的LV纯化结果:
澄清条件 3:TFF(100kDa MWCO )和深层过滤对比
4种澄清过滤条件下LV 纯化回收率对比:
Nereus LentiHERO® 4种澄清超滤条件LV纯化结果:
LentiHERO® 1 FPLC LV 纯化案例分享
LentiHERO® 1 FPLC 纯化悬浮体系LV 样品(TFF超滤换液)
LentiHERO® 1 FPLC可快速获得高回收率/纯度LV
Nereus LentiHERO® 离心管到 LentiHERO® 1 FPLC 纯化柱线性放大
悬浮体系生产的LVV工艺放大预估:
LentiHERO®优势总结:
载量高、流速快,精简纯化过程
工艺温和,回收率高
现有生产系统可获得更高的产量
高效,无需装柱、拆柱、测柱效
慢病毒的纯化技术是CGT领域中的重要研究方向之一。只有通过不断的研究和创新,才能够解决当前存在的问题,推动基因与细胞治疗领域的快速发展。
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货号 | 品名 | 规格 | 品牌 |
NL100100 | Nereus LentiHERO | 2unitpack | astreabioseparations |
3355-00025 | Aminophenylboronate P6XL - 25mL | 25mL | astreabioseparations |
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6717 | Aminophenylboronate P6XL Pre-packed Column - 1 x 5 mL | 1 x 5 mL | astreabioseparations |
英国Astrea Bioseparations于1987年成立,公司前身是Affinity Chromoatography Ltd,其从英国剑桥大学独立出来专注于吸附填料的研发和生产。Astrea Bioseparations 公司两大核心技术(产品)Mimetic ligand® 和PuraBead® 是公司产品的基石,迄今为止已有22个上市产品(FDA/EMA) 使用 Astrea Bioseparations公司的产品用于商业化生产,其中不乏跨国公司和新兴生物技术公司。
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